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卵白质降解速率和半衰期的运筹帷幄关于了解卵白质功能、开荒搬动疾病特异性卵白质降解的药物以及运筹帷幄搬动卵白质水平的小分子化合物具有紧迫真谛。卵白质品貌的搬动关于保管普通的细胞功能至关紧迫，细胞中的整个卵白质都在阻挡被降解和替换。

真核细胞有两种主要的卵白质降解路线——泛素-卵白酶体路线和自噬-溶酶体路线。其他具体的降解路线不错阅读往期著述：《5种卵白质降解路线你都了解吗？》

泛素-卵白酶体路线是细胞中卵白质降解的主要路线，参与多样卵白质的降解。它以一种特定的、高度复杂的机制降解细胞中的卵白质，何况不错通已往泛素化酶来逆转。自噬-溶酶体路线是一种自我降解流程，它通过溶酶体介导降解卵白质，通过包被卵白质并造成自噬溶酶体来高傲细胞的代谢需求。这两种路线在保管细胞普通的卵白质代谢中都起着至关紧迫的作用，卵白质的特地降解可能导致好多疾病，尤其是神经退行性疾病和癌症。

卵白质的半衰期变化很大，从几分钟到几天不等，卵白质降解速率的不同对卵白质功能很紧迫。常用的检测卵白质剖释性的次第包括：

（1）脉冲跟踪测定；（2）质谱工夫；（3）CuAAC（铜催化叠氮化物-炔烃环加成物）标志法；（4）卵白质降解路线阻扰剂；（5）CHX（环己酰亚胺）法。

（1）脉冲跟踪测定法是基于将辐射性核素标志的氨基酸（举例S35标志的蛋氨酸）添加到细胞培养基中，进而细胞中特定卵白质的变化流程不错通过免疫痕迹或其他次第检测。关系词，这种次第使用同位素，对运筹帷幄东说念主员的健康和安全有一定的负面影响，操作流程复杂。

（2）连年来，质谱工夫如故发展到检测卵白质一级结构的降解。因此，通过质谱法检测卵白质降解可用于运筹帷幄卵白质结构，功能和质料收尾。

（3）此外，据报说念，CuAAC（铜催化叠氮化物-炔烃环加成物）可用于标志细胞中新合成的卵白质，因而可用于运筹帷幄卵白质降解。

（4）卵白质降解运筹帷幄还不错通过添加阻扰剂来运筹帷幄细胞降解路线。举例，卵白酶体阻扰剂如MG-132、环氧霉素和硼替佐米通过阻断通过泛素-卵白酶体路线来阻扰卵白质降解。氯喹和巴弗洛霉素A1等阻扰剂通过中庸溶酶体中的酸性 pH值起作用，烟台圣嘉时钟业有限公司因为pH值是溶酶体卵白酶功能所必需的， 通河县利齐服务器有限公司因此氯喹和巴弗洛霉素A1不祥阻扰溶酶体路线介导的卵白质降解。

（5）运筹帷幄卵白质剖释性的最常用次第是卵白质翻译拒绝剂环己酰亚胺（CHX）。

CHX简介：CHX是灰链霉菌的产品， 首页-科昌索皮具有限公司可用于详情分子生物学中卵白质或酶的半衰期。CHX是一种翻译阻扰剂，不错阻断真核核糖体易位流程。值得缜密的是，CHX不错阻扰真核卵白合成但不可阻扰原核卵白质合成。CHX的优点是易于操作，不需要商酌正在进行的卵白质合成的影响，何况不错进行高通量筛选。另一方面它的主要污点是 i） 在莫得特异性的情况下阻断整个卵白质翻译，以及 ii） 具有高细胞毒性，长期科罚后可引起大领域细胞死字，故不适用于降解速率较慢的卵白质。因此，安防设备需要把柄合适的条款聘请CHX。

CHX使用次第：浅显来说即是用合乎浓度的CHX科罚细胞（时常为100μg/mL），科罚不同时间点网罗细胞进行WB本质检测跟着科罚时辰的延伸，卵白质水平的变化。

效用分析：半衰期短的卵白质会跟着时辰的推移速即降解，而半衰期长的卵白质跟着时辰的推移，降解的很少。因此，CHX不错在不使用辐射性同位素的情况下灵验地可视化卵白质降解的速率。

案例分析：不才面这个案例中，用50μg/mL的CHX科罚6h和12h，WB检测卵白抒发，发现敲低AHI1加快了Tyk2的卵白质降解。需要缜密的是，内参卵白Tublin比拟剖释，是以即便CHX科罚12h，Tublin也莫得昭彰的降解。

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敲低AHI1加快了Tyk2的卵白质降解（Ying Miao et al. 2023. bio protocol）

需要缜密的是，卵白质的降解速率互相之间各异很大。因此，在进行认真实本质之前，需要先摸索一下标的卵白质降解的速率。一般提出修复少至5个时辰点来检测卵白质的半衰期，以确保不错不雅察到昭彰的卵白质降解的变化趋势。

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